细胞冻存是生物医疗领域中保护细胞的重要技术,通过低温来延缓细胞的生命活动。这一方法使细胞能够长期保存,随时可用于各类实验。19世纪末,科学家们开始探索低温对生物组织的影响。早期研究显示,单纯的冷冻会导致细胞内部形成冰晶,进而引发渗透压失衡,最终导致细胞死亡。1937年,Luyet和Hodapp提出的“冰晶损伤”理论,为后续的冷冻保护研究奠定了理论基础。1949年,英国科学家在研究精子冻存时,偶然发现甘油能显著提高冷冻后精子的存活率。作为一种渗透性冷冻保护剂(CPA),甘油能够渗透细胞,降低冰点并减少冰晶形成,防止细胞在冻存过程中因脱水而破裂。
1959年,研究者发现二甲基亚砜(DMSO)具有优异的冷冻保护效果,尤其适用于哺乳动物细胞。DMSO比甘油更容易穿透细胞膜,并且毒性较低,迅速成为细胞冻存的标准保护剂之一。1963年,Peter Mazur提出了“冷冻损伤的两因素假说”,指出在快速冷冻时,细胞内冰晶形成会损伤细胞膜和细胞器,而在慢速冷冻时,细胞外冰晶的形成则会导致细胞脱水,浓缩胞内溶质,从而引发化学毒性。这一理论为程序化慢冻法提供了必要的科学依据。
在实验实践中,大多数细胞冻存遵循“慢速冻存”的原则,利用程序降温设备或程序化冷冻仪控制降温速度(通常为1°C/min),使细胞在冷冻过程中逐步脱水,从而避免细胞内结冰。这一方法显著提升了冻存细胞的存活率。研究表明,5%-10%的DMSO是细胞冻存的最佳浓度,具体比例可根据细胞类型进行调整,而对DMSO敏感的细胞则需降低其浓度。根据小尚的经验,8%的DMSO适用于大多数细胞系。同时,需根据细胞的培养难度调整血清比例,越难养的细胞需添加更多血清,而极为脆弱的细胞则可用血清+DMSO冻存,无需加入培养基。常用的冻存液配方是92% FBS + 8% DMSO(新手推荐)或92%完全培养基 + 8% DMSO(高级用户推荐)。
在提供相关产品方面,尊龙凯时的尚恩生物提供的特级胎牛血清呈浅黄色澄清且无溶血,经过严格检测确认无菌、无支原体、无噬菌体及相关牛源病毒,并且低内毒素(<3EU/mL),不含外源激素或生长因子。该血清在细胞培养测试中表现良好,适用于培养肿瘤细胞、原代细胞和大多数干细胞。
此外,货号为SNR-006的尚恩非程序性细胞冻存液(无血清)不含血清,且无需经过程序降温步骤,用户可以重悬细胞后直接置于超低温冰箱中,无需逐步降温或使用程序化冻存盒,极大简化了冻存操作,减少了血清对细胞及实验的影响。
在使用任何冻存液时,建议先进行冻检后再进行正式冻存:即在冻存24小时后,先复苏一支,确认细胞状态良好后再进行大规模冻存。同时,务必保留至少一瓶细胞培养,以防复苏失败导致细胞绝种。
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