尊龙凯时提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指导手册旨在为研究人员提供清晰详尽的细胞培养流程和注意事项，以确保细胞的健康生长和活性。

一、细胞培养条件

- 细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞
- 生长特性：贴壁生长
- 冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
- 培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
- 传代方法：建议第一次传代比例为1:2，培养后每两天更换培养基。
- 备注：使用无菌离心管收集培养基用于对比培养，如果效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后处理

在细胞状态良好时，需迅速用完全培养液灌满细胞瓶并封好。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，然后在超净工作台进行无菌操作。细胞需要放置在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便于细胞适应新环境。使用显微镜观察细胞状态，并拍摄不同倍数的照片进行记录（建议拍摄40x、100x和200x倍），前三天的照片至关重要，若未提供则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

3.1 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，待收集的培养液中保留5ml，再放置于37℃、5% CO2的培养箱中培养；当细胞密度超过80%时可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），在37℃培养箱中消化1-2分钟，在显微镜下查看消化情况，若细胞大部分变圆脱落，立即加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，重新加入1-2ml完全培养基。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新培养基至每瓶5-8ml，放入37℃、5% CO2培养箱内。

3.2 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩后加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管，在1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，将细胞沉淀与1ml的无血清冻存液（货号：C7001）混匀，装入冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱中，至少存放24小时后再转入液氮罐。

3.3 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，直到无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。处理方法为收集培养液至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清用于对比培养；沉淀部分加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应。再离心、弃上清、重悬后按比例分瓶传代，添加新培养基并培养。

五、售后条款

针对细胞出现的问题，尊龙凯时提供重发政策。需要重发的情况包括细胞在运输中出现问题或收到后48小时内出现污染等。客户需提供真实的实验情况和照片。若在72小时内未告知则视为产品合格。具体不重发的情况包括客户操作不当造成的污染或细胞状态不佳等。尊龙凯时承诺为客户提供优质的细胞产品和服务。